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1.準(zhǔn)備和個(gè)人防護(hù)?：實(shí)驗(yàn)人員穿戴實(shí)驗(yàn)服、口罩和手套，使用酒精棉球擦拭操作臺(tái)和手套區(qū)域，并點(diǎn)燃酒精燈確保無(wú)菌環(huán)境。樣品前處理包括稱量25克固體或半固體樣品，加入225mL無(wú)菌生理鹽水或磷酸鹽緩沖液，拍打均質(zhì)2分鐘制成初始稀釋液 ?。

2.?樣品稀釋和接種?：將稀釋液充分震蕩均勻，使用移液槍吸取1mL樣品勻液；對(duì)于液體樣品，可吸取25mL加入225mL稀釋液制成1:10勻液，再通過(guò)梯度稀釋（如1:100）制成不同濃度稀釋液 。吸取稀釋液垂直滴加在菌落總數(shù)測(cè)試片中央?yún)^(qū)域的培養(yǎng)基上，避免氣泡產(chǎn)生，使用壓板器輕輕壓下使樣液均勻分布，靜置至少2分鐘待吸收。

3.?培養(yǎng)過(guò)程?：將測(cè)試片透明面向上正置于培養(yǎng)箱中，設(shè)置溫度36±1℃，培養(yǎng)24~48小時(shí)；水產(chǎn)品樣品需調(diào)整至30±1℃培養(yǎng)48~72小時(shí)，測(cè)試片堆疊不超過(guò)20片以防止重疊影響結(jié)果 ?。

4.?結(jié)果計(jì)數(shù)和計(jì)算?：培養(yǎng)后，細(xì)菌生長(zhǎng)顯示紅色菌落，使用目視或菌落計(jì)數(shù)器在30-300CFU范圍內(nèi)計(jì)數(shù)；微小菌落計(jì)入，彌散菌落計(jì)為一個(gè)系統(tǒng)，計(jì)數(shù)困難時(shí)可選擇代表性小方格計(jì)算平均后乘以20估算?；谙♂尡稊?shù)和菌落數(shù)計(jì)算菌落總數(shù)，優(yōu)先選用菌落數(shù)在適宜范圍的平板，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)公式加權(quán)平均報(bào)告結(jié)果。

注意事項(xiàng)：避免測(cè)試片長(zhǎng)時(shí)間暴露于紫外光或熒光燈下，使用后需高壓滅菌處理；測(cè)試片出現(xiàn)少量黑點(diǎn)或氣泡為正?，F(xiàn)象，不影響檢測(cè)。

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